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免疫熒光實(shí)驗中細胞爬片如何使用

發(fā)布日期:2025-05-27 17:23:23   瀏覽量 :134
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首先是玻片的處理,普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊,先用洗衣粉洗干凈,用水沖靜烤干,然后泡酸過(guò)夜,撈酸后流水洗凈,烤干,置于器皿中高壓滅菌,然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。


爬片可以在培養皿 六孔板或24孔板中都可,我選擇在培養皿中爬。一為節約經(jīng)費(培養皿可以重復利用)二來(lái)覺(jué)得培養皿口大,操作比較方便。培養皿消毒同上,消毒時(shí)記得消兩把鑷子


具體操作是:用胰酶消化好細胞,充分吹打,使之成單細胞懸液(注意:這一點(diǎn)很重要,關(guān)系到將來(lái)爬出來(lái)片子的質(zhì)量)


取出消毒的培養皿,可以先加少量培養基(以使玻片與培養皿緊密接觸),將玻片小心放入擺放其中,然后將單細胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。最后蓋上培養皿置于37度5%CO2的暖箱中培養,根據細胞生長(cháng)狀況,24小時(shí)或更長(cháng)時(shí)間適時(shí)取出爬片。


爬片置于37度PBS中洗三次,每次3到5秒鐘,然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘,然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈,注意手法輕柔,要不然掉片很厲害。同時(shí)操作過(guò)程中注意玻片的正反面,要不然真的是前功盡棄。


將做好的爬片置于濾紙上晾干,然后用中性樹(shù)膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹(shù)膠徹底干了之后才能做后續實(shí)驗,要不然玻片會(huì )掉下來(lái)的,就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在-20保存備用,具體能保存多長(cháng)時(shí)間不太清楚,當然盡量早用。


 


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